【關(guān)鍵詞】 補(bǔ)骨脂藥材；,,總呋喃香豆素；,,紫外分光光度法
 
♣ 目的建立紫外分光光度法測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量,方法補(bǔ)骨脂藥材粉末經(jīng)索氏提取2 h，過(guò)聚酰胺柱后，采用紫外分光光度法，檢測(cè)波長(zhǎng)為245 nm對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的總呋喃香豆素進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果采用該方法可準(zhǔn)確測(cè)定補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量，補(bǔ)骨脂素在1.008～10.08μl/ml范圍內(nèi)吸光度與濃度的線性關(guān)系良好，樣品平均回收率為98.7%，精密度RSD為0.11%，重復(fù)性RSD為2.8%，穩(wěn)定性RSD為0.75%（4 h內(nèi)）。
♣ 結(jié)論該方法簡(jiǎn)單、準(zhǔn)確，可用于補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量測(cè)定。
♣關(guān)鍵詞：補(bǔ)骨脂藥材； 總呋喃香豆素； 紫外分光光度法
♣Determination of the Total Furanocoumarins in Fructus Psoraleae by UV Spectrophotometry．
♣Abstract：ObjectiveTo establish a UV spectrophotometry for determination of the total furanocoumarins in Fructus Prosraleae. MethodsThe powder of Fructus Psoraleae was extracted by CH3OH for two hours and puerariaed by polyamide column chromatography ;when it was determined by UV spectrophotometry, wave length was 245 nm.ResultsThe method had good linear relationship from 1.008μl/ml to 10.08 μl/ml,and the recovery rate was 98.7%．The relative standard deviation of accurate test and stability test were 2.8%and 0.75% respectively.ConclusionThe method is simple and accurate, and can be used for determination of the total furanocoumarins in Fructus Psoraleae.
♣　Key words： Fructus Psoraleae； Total furanocoumarins； UV spectrophotometry ．
♣　補(bǔ)骨脂為豆科植物補(bǔ)骨脂Psoralea corylifolia L.的干燥成熟果實(shí)。補(bǔ)骨脂味辛，苦，歸腎、脾經(jīng)。
♣　具有溫腎補(bǔ)陽(yáng)、納氣、止瀉之功效［1］。用于陽(yáng)痿遺精，遺尿尿頻，腰膝冷痛，腎虛作喘，五更泄瀉；外用治白癜風(fēng)、斑禿。呋喃香豆素類為補(bǔ)骨脂的主要活性物質(zhì)，用于治療白癜風(fēng)、多種婦科出血、鼻、牙齦出血及類血友病出血等癥［2］；同時(shí)有一定的抗癌活性及對(duì)成骨細(xì)胞的增殖作用。
♣　由于補(bǔ)骨脂中呋喃香豆素類成分無(wú)酚羥基，而其他成分包括擬雌內(nèi)酯類，補(bǔ)骨脂黃酮類及單萜酚類成分均有酚羥基，故采用聚酰胺柱色譜對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的呋喃香豆素進(jìn)行富集，以補(bǔ)骨脂素為對(duì)照品，建立了用紫外分光光度法測(cè)定總呋喃香豆素含量的方法，結(jié)果表明該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確，可用于補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素含量測(cè)定。
♣　儀器與試藥：UV1601型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)（日本島津），AW220型電子天平（日本島津），補(bǔ)骨脂素對(duì)照品、異補(bǔ)骨脂素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所），聚酰胺粉（30～60目）。
♣　方法與結(jié)果：供試品溶液的制備：上柱樣品的制備取補(bǔ)骨脂藥材粉末（過(guò)三號(hào)篩）0.5 g，精密稱定，置索氏提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取2 h，過(guò)濾，加0.5 g聚酰胺粉（30～60目）拌勻，即得。
♣　乙醇洗脫濃度的考察將樣品上聚酰胺柱（10 ml 30~60目聚酰胺，1×10 cm），水洗脫至無(wú)色，再依次以30%,50%,70%乙醇各洗脫100 ml，洗脫液進(jìn)行紫外全波長(zhǎng)掃描，圖譜見(jiàn)圖1~5。
♣　由上圖可以看出，30%乙醇洗脫液的紫外掃描圖吸收波長(zhǎng)為245 nm，與補(bǔ)骨脂素及異補(bǔ)骨脂素等呋喃香豆素的紫外掃描圖基本一致；50%乙醇洗脫液顯示為補(bǔ)骨脂酚的紫外吸收?qǐng)D；而70%洗脫液顯示為黃酮及擬雌內(nèi)酯類紫外吸收。
♣圖1 30%乙醇洗脫液（略） 
♣圖2 50%乙醇洗脫液（略）
♣圖3 70%乙醇洗脫液 （略） 
♣圖4 補(bǔ)骨脂素（略）
♣圖5 異補(bǔ)骨脂素 （略）
♣　乙醇洗脫用量的考察將樣品上聚酰胺柱，加水洗脫至無(wú)色，再加30%乙醇洗脫以 10 ml/min洗脫，每25 ml為分，取1 ml稀釋至10 ml，在245 nm處測(cè)定吸光度。結(jié)果見(jiàn)表1。
♣　表1 樣品30%乙醇洗脫液不同流分的紫外吸收（略）由上表可以看出，第10個(gè)流分所檢測(cè)到的吸光度已很低，故樣品上聚酰胺柱后，加水洗脫至無(wú)色，用30%乙醇以10 ml/min洗脫250 ml即得。
♣　結(jié)論根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果，最終確定補(bǔ)骨脂藥材供試品制備方法為取補(bǔ)骨脂藥材粉末0.5 g（過(guò)三號(hào)篩），精密稱定，置索式提取器中，加甲醇適量，加熱回流提取2 h，過(guò)濾，濾液加0.5 g聚酰胺粉（30～60目）拌勻，揮干，上聚酰胺柱，以30%乙醇洗脫250 ml。
♣　對(duì)照品溶液的配置取補(bǔ)骨脂對(duì)照品12.6 mg精密稱定，加甲醇超聲，定容至50 ml，再精密吸取1 ml，加甲醇定容至25 ml即得標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
♣　標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取上述對(duì)照品溶液1，3，5，7，10 ml，加甲醇定容至10 ml，于245 nm處測(cè)定吸收度,.并以吸光度與對(duì)照品濃度進(jìn)行回歸,得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程y=0.132 1x 0.008 8，r=0.999 7（n=5）。實(shí)驗(yàn)表明補(bǔ)骨脂素在1.008～10.08 μg/ml濃度范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系。
♣　精密度實(shí)驗(yàn)精密吸取上述對(duì)照品溶液1 ml，加甲醇稀釋至10 ml，于245 nm處測(cè)定吸光度，連續(xù)測(cè)定5次，結(jié)果表明5次測(cè)定的RSD為0.11%，故儀器精密度良好。
♣　穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)將精密度考察項(xiàng)下對(duì)照品溶液于0，6，12，24，48 h在245 nm處測(cè)定吸光度，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明RSD為0.75%，對(duì)照品溶液在4 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。
♣　重復(fù)性實(shí)驗(yàn)按照擬定的含量測(cè)定方法，取同一批藥材5份，每份0.5 g，分別制備樣品，測(cè)定吸光度，并計(jì)算其含量，實(shí)驗(yàn)結(jié)果5個(gè)樣品含量RSD為2.9%，表明本法重復(fù)性良好。
♣　回收率實(shí)驗(yàn)取已知含量的補(bǔ)骨脂藥材0.25 g，精密稱定，分別精密加入補(bǔ)骨脂素對(duì)照品溶液適量（3種不同水平，各2份），按供試品制備方法處理，進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。
♣　表2 回收率實(shí)驗(yàn)（略）由表2可知，3種水平6次實(shí)驗(yàn)的加樣回收率測(cè)定結(jié)果均在95%～105%之間，其平均值為98.7%，RSD為1.00%。
♣　樣品測(cè)定 取6批補(bǔ)骨脂藥材，每批0.5 g（過(guò)三號(hào)篩選），按供試品制備方法制備，測(cè)定吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中總呋喃香豆素的含量結(jié)果見(jiàn)表3。
♣　表3 6批補(bǔ)骨脂藥材含量測(cè)定結(jié)果（略）從表3可知，補(bǔ)骨脂藥材中總呋喃香豆素的含量在1%左右，各個(gè)批次藥材之間總呋喃香豆素的含量有較大的差異。
♣　討論：補(bǔ)骨脂中總呋喃香豆素是補(bǔ)骨脂中的主要活性物質(zhì)，補(bǔ)骨脂中呋喃香豆素沒(méi)有酚羥基，在聚酰胺柱上的吸附能力較補(bǔ)骨脂中的其他成分如黃酮類、擬雌內(nèi)酯類及單萜酚類為弱。
♣　根據(jù)這一特性，我們通過(guò)聚酰胺柱色譜對(duì)補(bǔ)骨脂藥材中的呋喃香豆素進(jìn)行了富集，并對(duì)乙醇洗脫的濃度與用量進(jìn)行了考察。
♣　結(jié)果以藥材提取液拌聚酰胺，上柱，水洗至無(wú)色，再以30%乙醇洗脫250 ml作為供試品溶液；以補(bǔ)骨脂素為對(duì)照品繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)定樣品中總呋喃香豆素含量，該方法靈敏度高，重復(fù)性好。
♣　根據(jù)擬定的方法，我們測(cè)定了6個(gè)不同批次藥材中中呋喃香豆素的含量，發(fā)現(xiàn)各個(gè)批次藥材含量有較大的差別，故有必要通過(guò)總呋喃香豆素。